شناسایی گونه سارکوسیستیس در گوسفندان ذبح شده شهر نهاوند به روش PCR-RFLP

فهرست مطالب

عنوان

صفحه

چکیده

فصل اول : مقدمه و کلیات

أ- 1-مقدمه

۲-۱-تاریخچه ........

۳-۱-ویژگی های انگل .

۴-۱ - اصطلاحات ....

۵-۱ طبقه بندی تک یاخته..

۶-۱-تاکسونومی اپی کمپلکسا

۷-۱-ساختمان اپی کمپلکسا...

۸-۱-نام گذاری سارکو سیستیس ..

۹-۱-چرخه زندگی سار کوسیستیس

۱۰-۱-بیماری زایی سارکو سیستیس در میزبانان واسط ...

۱۱-۱-بیماری زایی سارکوسیستیس در میزبانان نهایی ...

۱۲-۱-بیماری زایی و علائم در انسان ....................

5 ( ( (

۱۳-۱-ضایعات کالبدگشایی

۱۴-۱-نشانه های بالینی .

ادامه فهرست مطالب

عنوان

۱۵-۱- اپیدمیولوژی ..

۱۶-۱-کنترل ...

۱۷-۱-تشخیص مارکوسیتوزیس ...

۱۸-۱-ایمنی......

۱۹-۱ درمان ..

۲۰-۱-بیان مسئله ...

۲۱-۱ - اهداف ویژه ..

فصل دوم : مروری بر ادبیات تحقیق و پیشینه تحقیق

۱-۲- سارکوسیستوزیس در ایران..........................

۲-۲- وضعیت سار کوسیست در جهان........

فصل سوم :مواد و روش اجرای تحقیق

۱-۳- جمع آوری و آماده سازی کیست ها .

۲-۳- روش هضمی ..

۳-۳- استخراج DNA ..

..PCR -۴-۳

۵-۳- افزودن آنزیم های برش دهنده برای RFLP .............

ادامه فهرست مطالب

عنوان

۶-۳ - الکتروفورز نمونه های RFLP شده ..

فصل چهارم: نتایج ۱-۴- نتایج روش ۲-۴- نتایج PCR ۳-۴- نتایج RFLP.

فصل پنجم: بحث

۱-۵- بحث ..

۲-۵- پیشنهادات.

منابع و مآخذ..

فهرست تصاویر

عنوان

تصوير ۱-۱- او وسیست های عفونی سار کو سستیس .............

تصوير ۱-۲ - اووسيست سار کوسیست ............... تصویر ۱-۳- سارکوسیست های ماکروسکوپی در مری ..........

تصویر

۴-۱- کیست های ماکروسکوپی سارکوسیست در دیافراگم . ۵-۱- ساختمان تک یاخته های خانواده اپی کمپلکسا .......

تصویر ا

چرخه کلی تک یاخته سار کو سیت............

ا ا ا

چرخه زندگی سار کوسیستیس کروزی در گاو ..

تصوير ۱-۸- چرخه زندگی سارکوسیست ...

تصوير ۳-۱ - نمونه شاهد از مری دارای کیست های ماکروسکوپی

تصوير ۳-۲ - مقدار ۱.۳ گرم پپسین وزن شده در آزمایشگاه ...

تصوير ۳-۳- صاف کردن نمونه هضم شده با گاز غیر استریل ۳ لایه ای . تصوير ۳-۴- کیت Cinnagen برای استخراج DNA در آزمایشگاه

* }

تصویر ۳-۵- سانتریفیوژهای استفاده شده در آزمایشگاه ....

تصوير ۳-۶- دستگاه ترموبلاک...

تصوير ۳-۷- مراحل انجام PCR ..........

تصوير ۳-۸- پودر آگار وزن شده در آزمایشگاه .

ادامه فهرست تصاویر

عنوان

صفحه

تصویر 3-9- بافر ۱۰X TBE....

۳۷...

تصوير ۳-۱۰- آنزیم برش دهنده Taql در بن ماری در دمای C° ۶۵.............

تصوير ۳-۱۱- لود شدن نمونه ها در الکتروفورز .......

تصویر ۴-۱ الکتروفورز محصول PCR ژن ۱۸s rRNA که در آن قطعه ۶۰۹ جفت...

تصویر ۴-۲ الکتروفورز محصول PCR ژن ۱۸s rRNA سارکوسیستیس آریتی کنیس.

تصوير ۴-۳-الکتروفورز محصول PCR ژن ۱۸s rRNA سارکو سیستيس تنلا جداشده از گوسفند .۴۳

چکیده

هدف: سار کوسیستیس از شاخه اپی کمپلکسا است که زندگی دو میز بانه اجباری دارد. علف خواران (میزبان واسط) با خوردن آب و غذای آلوده به اسپر و سیست ها که توسط (گوشت خواران) میزبان اصلی دفع می شود، آلوده می شوند و متعاقب آن کیست های نسجی در احشاء ایجاد می شود. هدف از مطالعه حاضر شناسایی گونه های

مختلف سار کوسیستیس گوسفندان با استفاده از روش PCR-RFLP بوده است.

مواد و روش ها: در مطالعه حاضر مجموعا ۵۰ نمونه بافتی از عضلات مری و دیافراگم از گوسفندان ذبح شده در کشتارگاه نهاوند جمع آوری شد که حاوی کیست های ماکروسکوپی و میکروسکوپی بود. تخليص DNA نمونه ها با استفاده از کیت صورت گرفت. شرایط PCR برای تکثیر قطعه ۱۸s rRNA بهینه شد. برای تعیین گونه سارکوسیست های تحت مطالعه، با توجه به موقعیت محل برش آنزیم های برش دهنده، اقدام به انتخاب آنزیم شد.

نتایج: نتایج نشان داد که آغاز گرها کاملا اختصاصی بوده اند. ارزیابی PCR-RFLP روی نمونه ها نشان داد که اکثر کیست ها متعلق به بافت دیافراگم و در جنس ماده بوده است. کیست های میکروسکوپی متعلق به سار کو سپستیس آریتی کنیس و سار کو سیستيس تنلا است.

نتیجه گیری: با استفاده از آغاز گرها بر مبنای روش PCR-RFLP گونه های سار کوسیستیس میکروسکوپی و ماکروسکوپی گوسفندی را می توان از هم تفکیک داد.